硝基呋喃類藥物是一種抗生素，對大多數(shù)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌等病原體均有殺滅作用。硝基呋喃類藥物因?yàn)閮r(jià)格較低且效果好，被廣泛應(yīng)用于畜禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，以治療由大腸桿菌或沙門氏菌所引起的腸炎、疥瘡、赤鰭病、潰瘍病等。由于硝基呋喃類藥物及其代謝物對人體有致癌、致畸胎的副作用，中華人民共和國農(nóng)業(yè)部將硝基呋喃類藥物列為在飼養(yǎng)過程中禁止使用的藥物，在動物性食品中不得檢出。硝基呋喃類原型藥在生物體內(nèi)代謝迅速，其代謝產(chǎn)物分別為AOZ、AMOZ、AHD、SEM，和蛋白質(zhì)結(jié)合而相當(dāng)穩(wěn)定，故常利用代謝物的檢測來反應(yīng)硝基呋喃類藥物的殘留狀況。
本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的藥物殘留檢測產(chǎn)品，與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，能減少工作強(qiáng)度。
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，保存于2～8℃。切勿冷凍。
3、洗滌液【配液1】在使用前也需回溫。
4、編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50μL/孔到對應(yīng)的微孔中，再加入呋喃它酮代謝物酶標(biāo)物50μL/孔，然后再加入呋喃它酮代謝物抗試劑50μL/孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置于25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液【配液1】250μL/孔，充分洗滌4~5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、顯色：加入底物液A液50μL/孔，再加底物液B液50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置于25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15min。
8、測定：加入終止液50μL/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值(若無酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測法可進(jìn)行判定)。
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